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外泌體分離與提純
外泌體表征與鑒定
根據(jù)國際外囊泡協(xié)會(huì)發(fā)布的指導(dǎo)首創(chuàng)《MISEV 2018》, 外泌體特征通過NTA測粒徑分布、TEM電鏡分析形態(tài)和Western Blot檢測標(biāo)志蛋白三項(xiàng)鑒定方案來驗(yàn)證
NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度,TEM電子顯微鏡來觀察樣品中外泌體的形態(tài)特征,Western Blot檢測外泌體標(biāo)志蛋白。


Western Blot蛋白免疫印跡分析
外泌體表征與鑒定
Western Blot蛋白免疫印跡分析
Western blot是通過抗原抗體特異性結(jié)合的原理,檢測外泌體標(biāo)志蛋白,從蛋白質(zhì)層面對外泌體進(jìn)行鑒定。常用的外泌體標(biāo)志蛋白包括CD63、CD81、CD9、Flot1、 TSG101及Alix等。

檢測方法:ECL化學(xué)發(fā)光,多功能化學(xué)發(fā)光凝膠成像分析系統(tǒng)。

樣本要求:血漿、細(xì)胞上清、唾液、尿液外泌體蛋白量> 10 μg,蛋白濃度>0.2 μg/μL;干冰運(yùn)輸。

NTA 納米顆粒追蹤分析
外泌體表征與鑒定
NTA 納米顆粒追蹤分析
NTA分析是從整體上對外泌體的顆粒濃度和粒徑分布情況進(jìn)行檢測,具有準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

檢測儀器:Particle Metrix(ZetaView)? ?

樣本要求:避免反復(fù)凍融,-80℃保存,干冰運(yùn)輸。

TEM透射電子顯微鏡觀察法
外泌體表征與鑒定
TEM透射電子顯微鏡觀察法
TEM透射電子顯微鏡電鏡是從形態(tài)和大小上對外泌體形態(tài)結(jié)構(gòu)和大小進(jìn)行鑒定。

檢測儀器:透射電子顯微鏡(HITACHI,H-7650)

樣本要求:NTA顆粒濃度> 10?10?particles/mL,體積> 20 μL;避免反復(fù)凍融,-80℃保存,干冰運(yùn)輸。